期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
一种不配对粘末端连接的新策略
刘永全；高杰英；孔祥英
关键词：亚克隆, 不配对粘末端, 整合素
摘要：整合素是粘附分子的一个家族，是由α和β亚基通过非共价键连接而形成的一类异二聚体，目前已发现20多种［1］。α4β7就是其中一种，它的主要功能是通过与配体粘膜地址素细胞粘附分子-1(mucosal addressin cell adhesion molecule-1，MAdCAM-1)的相互作用而介导淋巴细胞在粘膜部位的归巢和定居，并参与该部位的免疫应答。抗β7的单抗（mAb）可有效阻断α4β7介导的多种功能，已成功用于多种研究。我们将编码β7亚基主要抗原表位的1.8 kb cDNA片段［2］，亚克隆入原核融合表达载体pGEX-3X，以期获取β7的原核表达产物、制备抗体及进行相应功能研究。由于载体与外源片段之间无合适的酶切位点，因此首先利用BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ位点，连接表达载体pGEX-3X和克隆载体pGEM-7Z，从而得以在pGEX-3X中引入SphⅠ位点，再利用BamH Ⅰ/SphⅠ位点，完成目的片段的亚克隆。该过程通过载体之间的连接，引入合适的酶切位点，巧妙地变不配对粘末端的连接为配对粘末端的连接，高效快速地完成了目的片段的亚克隆，不失为一种解决不配对粘末端连接的新策略，可为类似研究提供借鉴。 1 材料与方法1.1 菌株和质粒 大肠杆菌JM109、原核融合表达载体pGEX-3X、克隆载体pGEM-7Z，由本室保存。质粒pBS-β7（带有β7的全长cDNA），由David J. Erle博士惠赠［3］。1.2 限制性内切酶及连接酶 限制性内切酶EcoR Ⅰ，BamH Ⅰ，SphⅠ购自华美公司，T4 DNA连接酶购自大连六和通公司。1.3 p3X-1.8β7重组质粒的构建 首先，分别对表达载体pGEX-3X和克隆载体pGEM-7Z进行BamHⅠ/EcoR Ⅰ双酶切，再将二者连接，构建成重组质粒p3X-7Z。然后用BamHⅠ/SphⅠ处理带有β7全长cDNA的pBS-β7载体，回收1.8 kb目的片段，与做同样处理的p3X-7Z载体连接，即得到重组表达质粒p3X-1.8β7（图1）。 2 结果2.1 按图1所示构建重组质粒p3X-7Z，BamHⅠ/SphⅠ酶切鉴定，分别在3.0 kb和5.0 kb出现特异条带（图2），与设计相符，证明p3X-7Z重组质粒构建成功。2.2 按图1所示构建重组质粒p3X-1.8β7，BamH Ⅰ/SphⅠ酶切鉴定，分别在1.8 kb和5.0 kb出现特异条带（图3），与设计相符，证明p3X-1.8β7重组表达质粒构建成功。
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