期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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首页>军事医学杂志
- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
重组人蛋白C在CHO/dhfr+细胞中的表达与分析
张亚东；陈琳；卜凤荣
关键词：蛋白质C, 基因表达, 重组蛋白质量, 抗体, 单克隆
摘要：目的:人蛋白C具有重要的抗凝功能,与复发性血栓性疾病、蛋白C缺陷症、创伤等有重要关系.血源蛋白C成本高、工艺复杂且存在纯度、稳定性、安全性等问题,研制重组人蛋白C具有必要性.目前尚无此类产品上市.本研究拟从人肝细胞中克隆蛋白C的cDNA,构建人蛋白C的哺乳动物细胞表达载体,实现重组人蛋白C在CHO/dhfr+中的表达.方法: 用RT_PCR从人胎肝细胞mRNA中扩增人蛋白C的全长cDNA片段,将之克隆入pGEM_T载体并测序.目的片段插入真核表达载体pIRESneo以构建重组表达质粒.磷酸钙共沉淀法转染CHO/dhfr+细胞,G418筛选抗性克隆.Western 印迹法检测细胞培养上清.Hitrap Q进行色谱纯化.表达产物经蛙蛇蛇毒激活后以APTT法测定抗凝活性.结果:RT_PCR扩增到长1*!386*!bp的DNA片段,序列与已报道的人蛋白C一致.所构建的表达质粒pIREShPC转染CHO/dhfr+细胞,经G418加压筛选得到7株表达细胞.Western印迹法检测发现表达产物能与抗人蛋白C单克隆抗体结合,相对分子质量与人蛋白C一致.Hitrap Q纯化重组蛋白回收率＞60%.表达产物抗凝活性略低于天然人蛋白C.
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