期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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首页>军事医学杂志
- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
人HGF基因重组逆转录病毒表达载体及包装细胞株的构建和鉴定
王韫芳；南雪；岳文；李艳华；闫舫；裴雪涛
关键词：肝细胞生长因子, 包装细胞PT67, 逆转录病毒载体, PT/HGF细胞株, 转染
摘要：目的:构建携带肝细胞生长因子(HGF)的逆转录病毒载体,并建立高效、稳定生产HGF的包装细胞株.方法:以pcDNA3.0-HGF质粒为模板进行PCR反应扩增出HGF基因全长序列,亚克隆至逆转录病毒载体pMSCVneo构建重组逆转录病毒质粒,以脂质体介导转染包装细胞PT67,经G418筛选,进而挑选抗性集落扩大培养后,用靶细胞NIH3T3测定病毒滴度,筛选出高效产毒细胞株.扩大培养后进行RT-PCR鉴定HGF mRNA的表达.扩大培养NIH3T3细胞抗性集落(NIH3T3/HGF),并用细胞培养上清进行人肝癌细胞系HepG2的扩散试验.结果:PCR反应扩增出2 200 bp的HGF基因,构建了重组逆转录病毒表达载体pMSCV-HGF,测序鉴定正确.经脂质体介导转染包装细胞、G418筛选和NIH3T3测定病毒滴度,筛选出具有高病毒滴度(8.8×107 cfu /ml)的细胞集落,扩大培养后建立高效表达HGF的包装细胞株PT/HGF,RT-PCR证实HGF基因在PT/HGF中有转录.NIH3T3/HGF培养上清可使HepG2细胞扩散,形态改变.结论:成功构建了携带HGF的逆转录病毒载体pMSCV-HGF,并建立了稳定、高效生产有活性的HGF的产毒细胞株PT/HGF.
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