期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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首页>军事医学杂志
- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
人前列腺癌cDNA文库的构建和筛选
张惠；庞博；王健；周建光；李杰之；黄翠芬
关键词：前列腺肿瘤, C4-2细胞, 基因文库, 酵母双杂交
摘要：目的:PC-1基因是与前列腺癌相关的新基因,在雄激素非依赖和转移的前列腺癌晚期细胞系C4-2中高表达.为了进一步研究PC-1基因的功能及作用机制,构建C4-2细胞的Cdna文库,寻找与前列腺癌相关基因PC-1相互作用的蛋白.方法:从前列腺癌细胞系C4-2中提取总RNA,进而分离poly(A) + RNA,用poly(A)+ RNA进行反转录并以SMARTⅢTM和CDSⅢoligo(Dt)为引物进行PCR扩增,得到两端具有同源臂的PCR片段,以此同源臂为基础在酵母中实现同源重组.通过文库片段、线性化的Pgadt7-Rec和诱饵质粒Pgbkt7-PC-1-C共转化酵母AH109菌株,在文库构建的同时进行与PC-1相互作用蛋白的筛选;或先将文库片段,线性化的Pgadt7-Rec转化AH109,再利用AH109和Y187两种酵母菌株的接合生殖进行筛选.后用Far-Western印迹方法进一步从体外论证了PC-1蛋白可与自身相互作用形成二聚体.结果:构建了具有基因多样性和库容量足够大的人前列腺癌Cdna文库,双链Cdna片段的长度大小范围为250～5 000 bp.共转化的效率为4.3×105,重组效率为1.9×106,筛选的克隆数为4.3×105.接合法筛选时的接合效率为32%,筛选的克隆数为1.0×106.筛选到4个与PC-1蛋白相互作用的阳性克隆.从体外证明了PC-1蛋白可形成二聚体.结论:此文库的多样性和库容量均符合筛选需求.可用于前列腺癌相关基因的进一步筛选,已筛选得到的蛋白尚需进一步鉴定.
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