期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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首页>军事医学杂志
- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
重组肉毒神经毒素A轻链(BoNT/A LC)蛋白的表达、纯化与鉴定
贾宏丽；王景林
关键词：肉毒神经毒素A(BoNT/A), 轻链, 克隆表达, Ni-NTA亲和层析
摘要：目的:克隆、表达并纯化肉毒神经毒素A轻链(BoNT/A LC)片段,为BoNT/A的抗体制备和检测方法的建立奠定基础.方法:以PCR方法自肉毒梭菌中扩增BoNT/A轻链基因,直接插入pGEM-T载体,测序正确后再与表达载体pET21a构建重组表达载体pET21a-轻链,转化E.coli BL21(pLys)感受态细胞获得表达工程菌株并进行诱导表达,用Western 印迹鉴定重组BoNT/A 轻链.结果:经PCR获得的BoNT/A 轻链序列与GenBank中的BoNT/A轻链基因序列的一致性达99.9%以上.表达工程菌BL21/pET21a-A LC于37℃经0.7 mmol/L IPTG诱导6 h,目的蛋白获得高表达,约占菌体总蛋白的23%.经过镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析一步纯化,重组BoNT/A 轻链的纯度可达97%以上.Western 印迹结果表明,重组BoNT/A 轻链与抗天然BoNT/A的马血清发生特异性的抗原抗体结合反应.结论:成功克隆、表达并纯化了BoNT/A 轻链片段,其抗原性良好.
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