期刊简介
本刊(中国自然科学核心期刊)系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主,选登部分研究简报,技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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- 杂志名称:军事医学杂志
- 主管单位:军事医学科学院
- 主办单位:军事医学科学院
- 国际刊号:1674-9960
- 国内刊号:11-5950/R
- 出版周期:月刊
期刊荣誉:中国自然科学核心期刊期刊收录:知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
人THAP11基因RNAi慢病毒表达系统的建立
孔祥祯;尹荣华;郑巍薇;詹轶群;杨晓明;李长燕
关键词:THAP11, RNA干扰, 慢病毒, 细胞系, 人造血干细胞
摘要:目的 构建人THAP11基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,制备高滴度病毒颗粒,敲低K562细胞和脐带血CD34+细胞中THAP11表达.方法 采用第三代慢病毒包装系统,将含有特异性干涉THAP11 的DNA序列克隆入穿梭质粒pSicoR中,构建siTHAP11-pSicoR质粒.在脂质体介导下,siTHAP11-pSicoR与包装质粒pLP1,pLP2,pLP/VSVG 共转染HEK293T细胞,获得高滴度慢病毒颗粒.感染K562细胞,检测内源THAP11敲低效果.感染人CD34+细胞,流式分选GFP阳性细胞,检测原代细胞中THAP11的敲低效果.结果 成功构建针对THAP11两个位点的RNAi慢病毒载体siTHAP11-1和siTHAP11-2并获得慢病毒颗粒,病毒滴度检测可达1.8×108 TU/ml.感染K562细胞后建立稳定株,THAP11的蛋白水平和mRNA水平均有下调.感染CD34+细胞效率达30%以上,siTHAP11-1可下调THAP11mRNA约80%,siTHAP11-2约下调85%.结论 成功构建THAP11的RNAi慢病毒载体,包装后的病毒颗粒可有效敲低细胞株及原代细胞中内源性THAP11的表达,为后续研究THAP11对CD34+细胞的影响奠定基础.
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