期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及体外亲和筛选
王晗；于蕊；张晓鹏；任军；谢娜；樊红艳；张金龙；房婷；于长明；陈薇
关键词：破伤风, 破伤风毒素, 单链抗体, 逆转录聚合酶链反应, 细菌噬菌体
摘要：目的 构建人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,筛选抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)的特异性单链抗体(scFv).方法 利用RT-PCR从5名破伤风抗体滴度较高的健康献浆员外周血淋巴细胞中获得全套人破伤风抗体VH和VL基因,经过重叠PCR将VH和VL基因连接获得scFv片段.将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转化大肠TG1感受态菌,获得抗体库.以TeNT-Hc为抗原对抗体库进行3轮筛选,获得特异性人源性抗TeNT-Hc单链抗体.scFv由pET32a(+)表达载体表达,产物包涵体采用HisTrap FF预装柱纯化并透析复性.采用非竞争酶免疫实验法测定scFv亲和常数(affinity constant,KD值).检测scFv抑制TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的体外中和活性,计算抑制率.结果 构建库容量为1×108的人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,经过筛选获得3株特异性较好的人源性抗TeNT-Hc单链抗体.原核表达结果显示,3株scFv均以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的40％～45％.包涵体经洗涤、纯化和复性后,scFv均保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,1L培养物经纯化后可获得4 ～6 mg scFv蛋白.亲和力测定结果,27G、22D和S-4-7H-scFv的KD值分别为(1.25×10-7),(2.31×10-7)和(1.97×10-7)mol/L.3株抗体对TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的抑制率分别为64.5％,58.6％和51.5％.结论 人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及具有体外中和活性的特异性抗TeNT-Hc单链抗体的获得,为人破伤风基因工程中和抗体的制备奠定了良好基础.
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