期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
蜘蛛牵引丝蛋白MaSp1原核表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化
乔鑫；王妍；李俊杰；段翠密；王海滨；周瑾；杜芝燕；王常勇
关键词：MaSp1, 基因工程, 原核表达, 蛋白质纯化
摘要：目的：通过基因工程手段实现牵引丝关键组成蛋白MaSp1在大肠杆菌中的异源表达，并对其进行分离纯化，从而建立基因工程蜘蛛丝基因序列串联拼接、载体构建以及原核表达与纯化的关键技术体系。方法利用同尾酶连接法对合成的基因工程蜘蛛丝基因单体序列进行串联拼接，获得多倍串联体克隆重组子，将鉴定正确的多倍串联体克隆重组子与原核表达载体pET28a（＋）连接，转化至大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导其表达，表达产物通过SDS-PAGE和Western印迹进行鉴定。在此基础上对工程菌进行高密度发酵，所获蛋白通过硫酸铵分级分离方法进行纯化。结果与结论成功构建了基因工程蜘蛛丝MaSp1多串联体的表达载体，原核表达蛋白的相对分子质量与预期一致，且纯化的目的蛋白纯度达80％以上。上述研究工作为开展基因工程蜘蛛丝蛋白的规模化制备建立了关键技术方法，并为后续基因工程蜘蛛丝的人工纺丝提供必要的前提和工作基础。
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