期刊简介

               本刊(中国自然科学核心期刊)系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主,选登部分研究简报,技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。                

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  • 杂志名称:军事医学杂志
  • 主管单位:军事医学科学院
  • 主办单位:军事医学科学院
  • 国际刊号:1674-9960
  • 国内刊号:11-5950/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中国自然科学核心期刊期刊收录:知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
军事医学杂志2014年第07期

酮古龙酸菌Y25 D-2-羟酸脱氢酶的表达、纯化与酶学性质

梁钰英;熊向华;朱斌;赵楠;汪建华;张惟材

关键词:酮古龙酸菌, D-2-羟酸脱氢酶, 酮古龙酸还原酶, 表达, 纯化
摘要:目的:克隆酮古龙酸菌D-2-羟酸脱氢酶(2-hydroxyacid dehydrogenase , HADH)基因hadh,并在大肠杆菌中进行表达、纯化和酶学性质检测。方法 PCR扩增酮古龙酸菌D-2-羟酸脱氢酶基因hadh,构建表达载体pTIG-hadh,转化大肠杆菌BL21(DE3),对重组菌进行诱导表达,表达产物经Ni+亲和层析柱进行纯化后进行酶学性质检测。结果 SDS-PAGE分析结果显示,重组菌中HADH表达量可达菌体总蛋白的50%以上,相对分子质量约35×103。酶学性质检测结果表明,纯化的HADH以2-酮基古龙酸(2-keto-gulonic acid,2-KGA)为底物,适pH 8.0,适温度45℃,几种常见金属离子和螯合剂对HADH的活性影响微弱或无影响,以2-KGA为底物时的HADH大反应速度27 U/mg,Km值为2.6 mmol/L,体内酶活检测结果表明,HADH能够代谢2-KGA。结论重组HADH在大肠杆菌中获得了高效表达,并研究了其酶学性质,为后续山梨糖代谢通路研究和进一步提高糖酸转化率奠定了基础。