期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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首页>军事医学杂志
- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
Endo-H在毕赤酵母中的表达、纯化及其在N-糖基化分析中的应用
支艳艳；唱韶红；巩新；宋西勇；吴军；刘波
关键词：内切β-N-乙酰氨基葡糖苷酶H, 毕赤酵母, N-糖基化
摘要：目的：通过巴斯德毕赤酵母（ Pichia pastoris）表达制备内切β-N-乙酰氨基葡糖苷酶-H（ endo-beta-N-acetyl-glucosaminidase H ，Endo-H），并用于蛋白质的N-糖基化分析。方法根据GenBank中公布的褶皱链霉菌（ Strepto-myces plicatus） Endo-H的cDNA序列，设计并合成Endo-H全基因，将其克隆至P．pastoris表达载体pPIC9中，重组质粒转化P．pastoris JC308宿主菌，工程菌经甲醇诱导，分泌表达Endo-H，目的蛋白经疏水层析、凝胶过滤两步纯化后，纯度可＞95％。成品用于基于DNA测序的荧光辅助糖电泳（ DNA sequencer assisted fluorophore-assisted carbohy-drate electrophoresis，DSA-FACE）分析核糖核酸酶B（ribonuclease B，RNaseB）的糖基结构，比较了Endo-H与商品化N-糖酰胺酶F（peptide-N-asparigine amidase F，PNGase F）的糖基切割功能。结果利用P．pastoris表达制备Endo-H，可切割天然或变性状态下的β-1，4-糖苷键连接的甘露糖型结构糖链，不能切割复杂型糖链糖蛋白；经DSA-FACE分析，结果显示Endo-H酶切RNaseB后其糖链为Man5 GlcNAc-Man9 GlcNAc，PNGaseF酶切RNaseB的糖链为Man5 GlcNAc2-Man9 GlcNAc2，两者相差一个GlcNAc。结论通过P．pastoris制备的Endo-H具有天然生物活性，可用于蛋白质的N-糖基化结构分析。
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