期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
携带免疫基因的前列腺癌特异性溶瘤腺病毒制备及功能验证
薛淑雅；杨月峰；王华；肖凤君；孙慧燕；张群伟；王秀冬；王立生
关键词：前列腺癌, 溶瘤腺病毒, 免疫基因
摘要：目的制备前列腺癌特异性免疫溶瘤双功能腺病毒Ad-PL-PPT-E1A，评价其体外溶瘤和免疫激活功能。方法以LNCaP细胞和Jurkat细胞的cDNA为模板，采用普通PCR和巢式PCR分别扩增获得前列腺特异性抗原（ prostate specific antigen，PSA）基因、CD40L-N 基因和 CD40L-C 基因；并采用重叠 PCR 方法将 PSA、Linker、CD40L-N 和CD40L-C基因依次连接并扩增获得融合蛋白基因PSA-IZ-CD40L（PL）。采用以Adeasy系统为基础的溶瘤腺病毒构建体系，构建并制备携带PL的溶瘤重组腺病毒Ad-PL-PPT-E1A。以不同感染复数（multiplicity of infection， MOI）的溶瘤腺病毒Ad-PL-PPT-E1A感染PC3M细胞后不同时间点，流式细胞术检测细胞凋亡情况；50 MOI的Ad-PL-PPT-E1A感染PC3M细胞，于48 h收集其裂解液，并将其作用于正常人外周血单个核细胞，CCK8检测细胞增殖能力。结果 PCR成功扩增并连接获得融合蛋白基因PL，构建并制备了携带PL基因的溶瘤腺病毒Ad-PL-PPT-E1A。 RT-PCR和Western印迹检测结果显示，Ad-PL-PPT-E1A可在PC3M细胞中高效表达E1A和PL蛋白。将Ad-PL-PPT-E1A感染PC3M细胞后，可见明显的细胞病变；同时，流式细胞检测结果显示，当感染滴度达到200 MOI时，48 h的凋亡率达到70．67％±2．98％。 CCK8结果显示，Ad-PL-PPT-E1A感染后，可恢复PC3M细胞裂解液对人外周血单个核细胞的抑制作用。结论成功制备和鉴定了前列腺癌特异性免疫溶瘤双功能腺病毒Ad-PL-PPT-E1A，并在体外证实了其具有溶瘤和免疫的双重功能。
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