期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
E4 F1真核表达载体的构建及与p53的相互作用
廉攀峰；程龙；关鑫；邹大阳；梅玲；沈媛；任伟；张菊会；叶棋浓；王恩群
关键词：E4 F1, P53, 蛋白相互作用
摘要：目的：构建E4 F1野生型及缺失32～81位氨基酸的真核表达载体，检测其与p53的相互作用及对下游基因p53的调节。方法分别用普通PCR和重组PCR方法从乳腺文库中扩增E4F1野生型编码序列及缺失32～81位氨基酸的突变型序列，分别将其以正确相位构建到pXJ40-MYC载体中，得到重组质粒MYC-E4F1和MYC-E4F1（Δ32-81），分别转化大肠杆菌DH5α，重组质粒经酶切鉴定并转染293 T细胞， Western印迹检测蛋白的表达。将MYC-E4F1和MYC-E4F1（Δ32-81）质粒与FLAG-p53质粒共转染293T 细胞，免疫共沉淀实验检测其相互作用，野生型及缺失突变型表达载体共转染骨肉瘤细胞U2OS，检测其对下游基因p53的调节。结果 E4F1重组质粒及其突变型构建成功，在293 T细胞中鉴定表达正确，野生型及突变型E4 F1均与p53存在相互作用，突变型的结合能力增强，野生型E4F1升高p21蛋白表达水平，而突变型不改变p21蛋白水平。结论成功构建E4F1野生型及缺失32～81位氨基酸的突变型真核表达载体，二者都能与p53相互作用且突变型结合能力更强，野生型E4F1升高基因p53的靶基因p21的蛋白表达水平，而突变型不改变靶基因p21的蛋白水平。该研究为进一步研究E4 F1对p53的调节及其机制奠定了基础。
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