期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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首页>军事医学杂志
- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
利用CRISPR／Cas方法建立RNase L基因稳定敲除细胞株
李瑞花；付汉江；钟一然；沈远；朱捷；郑晓飞
关键词：CRISPR/Cas技术, RNase L, 小鼠, 基因敲除, 同源重组, 内切核糖核酸酶类, 转染, 潮霉素B
摘要：目的：利用CRISPR／Cas9技术建立人RNase L基因稳定敲除的细胞株。方法根据GenBank中RNase L基因序列，设计RNase L敲除的小指导RNA（ sgRNA）序列，将其克隆到pCas-Guide真核表达载体中，获得pCas指导RNA（ gRNA）载体；设计供体DNA的同源臂序列，通过搭桥PCR将左同源臂、潮霉素B抗性基因和右同源臂扩增成为一条片段作为同源重组的修复模板，并将其克隆到pBackZero-T表达载体上，获得pBackZero-T-RNase LK载体。将上述两个载体共转染HEK293细胞，用潮霉素B筛选，通过Western印迹和DNA测序等技术验证RNase L从基因组上敲除。结果与结论成功构建了载体pCas-gRNA和pBackZero-T-RNase LK，Western印迹和DNA测序结果表明，成功获得5株RNase L缺失的细胞株，为探讨RNase L的生物学功能和研究其分子机制奠定了基础。
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