期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
利用翻译偶联实现广谱抗病毒蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达
邢伶越；谢德健；叶丙雨；张章；李平；沈文龙；师明磊；张彦；赵志虎
关键词：小泛素相关修饰蛋白质类, pTIG-mSUMO, 原核表达, 可溶性, 翻译偶联, 非融合
摘要：目的：以具有广泛助溶活性的小泛素相关修饰蛋白（ small ubiquitin－related modifier，SUMO）为辅助蛋白，利用翻译偶联，构建一种新型非融合可溶原核表达载体，实现广谱抗病毒蛋白RA在大肠杆菌中的非融合可溶表达。方法以PCR方法从酵母基因组中克隆SUMO蛋白基因smt3并进行定点突变，去除其中的EcoRⅠ酶切位点，获得同义突变体mSUMO。通过翻译偶联Linker序列的设计、合成，构建以mSUMO蛋白为辅助蛋白的翻译偶联表达载体pTIG－mSUMO。 PCR扩增获得带有相应酶切位点的广谱抗病毒蛋白 RA 的基因，将其克隆至 pTIG－mSUMO中，获得表达载体pTIG－mSUMO／RA，实现RA在大肠杆菌中的非融合可溶性表达。结果 IPTG诱导蛋白表达以后，SDS－PAGE和Western印迹检测证实，目的蛋白RA的表达量明显增加，且可溶比例约占50％。结论以优化后的SUMO为辅助蛋白，成功构建了一种非融合的可溶原核表达载体pTIG－mSUMO，实现了RA蛋白在大肠杆菌中的高效非融合可溶表达，既提高了表达水平，也提高了可溶性。 pTIG－mSUMO作为一种可溶的非融合表达载体，在实现外源蛋白的高效可溶表达方面，很可能具有一定的普遍性。
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