期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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首页>军事医学杂志
- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
DEK基因RNAi慢病毒表达载体的构建及其功能鉴定
朱杰；刘婕；丁丽华；禾荣华；张亚楠；陈志达；罗晓丽；叶棋浓；吕朝晖
关键词：DEK基因, RNA干扰, 慢病毒载体, 乳腺肿瘤, 人乳腺癌细胞ZR75-1, 基因表达, 质粒, 转染
摘要：目的：构建DEK基因的RNA干扰（ RNAi）慢病毒表达载体，并对其生物学功能进行初步检测。方法采用RNAi技术，根据DEK基因的序列，确定其有效靶序列，合成DEK基因的Oligo DNA，退火形成双链DNA，将其克隆到经BamHⅠ与EcoRⅠ酶切后的小干扰RNA（ siRNA）表达载体PSIH-H1上，产生PSIH-H1-DEK慢病毒载体，筛选阳性克隆并测序鉴定。与3个包装质粒共转染293T细胞，包装成慢病毒后感染乳腺癌细胞ZR75-1，经嘌呤霉素（ puromycin，puro）筛选2周后，收集部分细胞利用实时聚合酶链反应（ real time-PCR，RT-PCR）和Western印迹分别检验DEK在信使RNA （ mRNA ）和蛋白水平的敲低效果，并通过细胞生长实验检测DEK对人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞生长的影响。结果 PCR和DNA测序结果证实，DEK siRNA慢病毒表达载体PSIH-H1-DEK构建成功。 RT-PCR和Western印迹结果显示，构建的DEK siRNA可有效抑制DEK基因的表达，并由此建立了敲低DEK的稳定克隆。生长曲线实验表明， DEK siRNA可抑制人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞的生长。结论成功构建了DEK基因的RNAi慢病毒表达载体，感染人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞后，有效沉默了ZR75-1细胞中的DEK基因的表达，为进一步研究DEK基因在乳腺癌中的作用奠定基础。
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