期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
E6AP蛋白结构域突变真核表达载体的构建及其生物学功能检测
熊加秀；丁丽华；营孙阳；陈志达；张亚楠；贾小萌；陈滢洁；刘文忠；叶棋浓
关键词：E6AP, P53, 结构域突变, 泛素化, 肿瘤
摘要：目的 构建E6AP蛋白结构域突变真核表达载体,并瞬时转染肿瘤细胞,对其生物学功能进行初步检测.方法 以本实验室保存带有myc标签的E6AP质粒为模板,采用PCR技术扩增出E6AP(1~494)结构域和E6AP (495~852)结构域(即E6AP的HECT结构域)编码区(CDS)序列,将其插入到pXJ-40-myc载体中,双酶切和测序验证后瞬时转染人胚肾293 T细胞,通过Western印迹鉴定其表达及功能;转染人乳腺癌细胞ZR75-1和人胃癌细胞BGC-823,通过CCK-8法测定细胞生长曲线. 结果 从E6AP蛋白全长CDS中扩增得到约1479、1071 bp的DNA结构域片段,并成功克隆至pXJ-40-myc载体上,且测序与目的序列完全一致;转染人胚肾293 T细胞后,目的蛋白在细胞内成功表达,并且E6AP(495~852)结构域可明显抑制P53蛋白水平,而E6AP(1~494)结构域无抑制作用;细胞生长曲线结果显示,转染E6AP(495~852)结构域突变质粒的乳腺癌、胃癌细胞较空载体细胞生长差异具有统计学意义,而E6AP(1~494)对细胞生长无明显变化. 结论 成功构建了myc-E6AP(1~494)、(495~852)结构域突变真核表达载体,为进一步研究E6AP蛋白在相关肿瘤发生、发展中的作用奠定一定的基础.
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