期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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首页>军事医学杂志
- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
基于CRISPR/Cas9基因编辑技术的RIP1稳定敲除细胞模型的构建及功能研究
陈瑶；刘青；邢微微；陈惠华；张冬冬；王园园；邹民吉；徐东刚；刘中成
关键词：CRISPR/Cas9系统, 基因敲除, 受体相互作用丝/苏氨酸蛋白激酶1, HaCaT细胞, 凋亡, 细胞增殖
摘要：目的 利用CRISPR/Cas9技术构建RIP1稳定敲除的人永生化表皮细胞HaCaT细胞株,在此基础上对RIP1功能进行探究.方法 针对GenBank中RIP1基因序列,设计靶向RIP1不同外显子的小指导RNA(sgRNA),并将其克隆至SpCas9-2A-Puro V2.0(PX459)载体中,获得PX459-sgRNA基因敲除载体.将上述载体转染HaCaT细胞并通过嘌罗霉素筛选获得阳性克隆,免疫印迹和DNA测序技术进一步鉴定RIP1敲除效果佳的单克隆.通过CCK-8实验检测RIP1缺失对细胞增殖能力的影响.分别用TNF-α处理HaCaTWT细胞和HaCaTRIP1KO细胞,流式细胞仪检测敲除RIP1对TNF-α诱导细胞死亡的影响,进一步通过胱天蛋白酶(caspase)抑制剂Z-VAD-FMK判断细胞死亡类型.结果与结论 利用 CRISPR/Cas9 系统成功构建 RIP1 完全敲除的细胞模型,功能分析发现敲除 RIP1导致细胞增殖能力减慢;HaCaTRIP1KO对 TNF-α诱导的死亡异常敏感,这种死亡能被 Z-VAD-FMK 显著抑制,证明为caspase 依赖性细胞凋亡.该研究为探究 RIP1 在皮肤损伤中的作用奠定了基础.
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