期刊简介
本刊（中国自然科学核心期刊）系军事医学科学院主办的国内外公开发行的综合性学术期刊。本刊以刊登军事医学及相关学科的创新性论著为主，选登部分研究简报，技术方法及有一定指导性的文献综述。内容涉及放射医学、微生物学与流行病学、药理学与毒理学、药物化学、基础医学、卫生学与环境医学、卫生装备、临床医学及医学高新技术等领域。
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- 杂志名称：军事医学杂志
- 主管单位：军事医学科学院
- 主办单位：军事医学科学院
- 国际刊号：1674-9960
- 国内刊号：11-5950/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国自然科学核心期刊期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
CRISPR/Cas9介导的prmt3基因敲除对A549细胞的影响研究
朱跃；彭昌民；陈亚丽；杨晓明；裴华东
关键词：PRMT3, CRISPR/Cas9, 非小细胞肺癌, 增殖细胞
摘要：目的 利用CRISPR/Cas9技术,构建靶向精氨酸甲基转移酶3(PRMT3)的基因编辑质粒,建立prmt3基因稳定敲除的A549细胞株,检验prmt3基因敲除效率及其对A549细胞增殖的影响.方法 设计靶向prmt3基因的sgRNA序列,将合成的片段克隆到CRISPR/Cas9质粒载体LentiCRISPR中,挑取单克隆进行测序验证.将构建好的重组质粒和空载体分别进行慢病毒包装,并感染A549细胞,利用嘌罗霉素进行筛选获得PRMT3稳定敲除细胞株,Western印迹检测细胞中PRMT3蛋白的敲除效率.将敲除PRMT3的A549细胞进行单克隆分选,分别利用平板克隆形成实验检测PRMT3敲除后细胞增殖能力,平板划痕实验检测其迁移能力,流式细胞技术检测细胞周期的变化,质谱进行蛋白质组学分析,初步筛查PRMT3可能的底物.结果 经测序验证,成功构建了靶向prmt3基因的LentiCRISPR-PRMT3-sgRNA质粒.经Western印迹检测,A549 PRMT3敲除株中PRMT3的蛋白表达水平明显降低.经单克隆分选,成功获得PRMT3完全敲除的A549细胞株.PRMT3敲除导致A549细胞的克隆形成能力明显增强,细胞迁移能力不变,细胞周期发生G2/M期阻滞.进一步用蛋白质组学的方法初步鉴定了PRMT3可能的底物.结论 利用CRISPR/Cas9技术成功构建了PRMT3稳定敲除的A549细胞株,发现PRMT3能调控细胞周期和增殖,并对其分子机制做了初步探索.
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